超声细菌芽孢裂解生物检测

杆菌等威胁因子的有效方法，但芽孢坚硬的外壳阻碍核酸检测。现有裂解方法存在不足，超声法在自动化流体生物检测系统的裂解方法开发中前景较好。此前开发的超声流通式裂解系统存在问题。
对枯草芽孢杆菌进行培养、诱导产孢，经多次洗涤、离心后保存，实验前调整浓度。
通过平板计数法，对处理后的芽孢进行10倍系列稀释，接种培养后计算菌落形成单位，从而确定芽孢活力百分比。自动化芽孢裂解模块采用SIA流体平台，超声系统由电源、信号源、放大器和两个换能器等组成。
设置与处理样本相同条件的对照，还进行额外对照实验，以探究DNA增加机制是热、超声还是两者协同作用。
用特定引物和探针，针对枯草芽孢杆菌recA基因进行实时PCR，在96孔板中反应，通过标准曲线计算样本中细胞数量，进而分析DNA可利用性。

通过两个换能器在超声场中处理样本，模拟圆柱形聚焦换能器，80μL样本以8μL步长间歇流动，处理时间可调整。双换能器系统比单换能器系统在增加DNA可利用性上快约5倍。
超声处理时间、有无玻璃珠及热对芽孢裂解的影响。超声处理（无论有无玻璃珠）可增加ΔCt值、降低芽孢活力、破坏芽孢外壳；单独热作用虽使芽孢活力几乎丧失，但未增加DNA可利用性；有玻璃珠的超声处理ΔCt值更大，8μL步长处理时，50s处理时间效果最佳，此时DNA增加最多，芽孢活力最低。
开发的双换能器流通式超声裂解模块，确定了流通式裂解的经验参数，明确了增加可扩增DNA的能量和条件。该装置可用于常规实验室提取，也可集成到现场生物检测系统中，与其他自动化单元结合，在生物检测前去除干扰和抑制剂。

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