高效温和大肠杆菌裂解

高效温和大肠杆菌裂解 – 杆菌超声裂解 – 上海瀚翎

蛋白纯化是研究蛋白性能与结构实验的关键环节，而大肠杆菌裂解作为纯化的首步，核心目标是将蛋白从细胞内高效释放至上清中，同时最大程度保护蛋白活性。目前主流的大肠杆菌裂解方法分为物理法与化学法两类，各有优劣但均存在一定局限。

物理方法包括超声、均质、研磨、冻融等，优势在于不引入外源杂质、成本较低且裂解效率高，但操作流程相对繁琐，机械力易破坏目的蛋白结构；化学方法涵盖有机溶剂法、酸碱裂菌法、溶菌酶法等，不受样品体积限制，可处理微升至升级别样品，不过部分化学试剂可能影响蛋白活性，且部分方法重复性较差。

针对传统方法的痛点，新型大肠杆菌裂菌液应运而生，实现了快速、温和、低成本的裂解需求，为蛋白纯化前处理提供了更优方案。该裂菌液为单组分配方，操作简单且重复性好，无需复杂设备辅助。其核心成分具备高效裂解能力：溶菌酶可在1分钟内穿透细菌细胞壁并将其降解为胞壁二糖，核酸酶则能在1分钟内快速消化细菌DNA与RNA，降解为寡聚核苷酸片段，双重作用大幅提升裂解效率。

该裂菌液的应用的显著优势在于，能有效降低裂解后上清液粘度，避免因核酸残留导致的后续处理困难；温和的裂解条件可抑制目的蛋白降解，最大程度保留蛋白活性与完整性，同时提升样品澄清效果，为后续上柱纯化奠定良好基础，还能减少内毒素污染风险。

根据实验验证了其优异性能：以绿色荧光蛋白为样品的测试显示，随着裂菌液添加比例提升或裂解时间延长，裂解效果逐步优化，1×浓度为推荐用量，可通过调整用量或时间进一步提升效果。选取两种不同蛋白进行对比实验，分别采用超声法与该新型溶菌酶裂解法处理，电泳结果显示，新型裂解法获得的目的蛋白条带下方杂带更少，洗脱后纯度显著高于超声法。

相较于传统超声裂解法，新型裂菌液的核心优势可总结为五点：一是操作简便，单组分配方无需复杂配比，上手难度低；二是省时高效，加入后最快十分钟即可完成裂解，耗时较常规方法缩短一倍以上；三是蛋白活性与纯度更优，温和条件避免机械力对蛋白的破坏，保障实验质量；四是优化纯化流程，核酸酶降解核酸提升澄清度，加快上柱流速；五是兼容性广，不含EDTA组分，可适配非耐受型金属螯合层析介质纯化，适用场景更丰富。

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